siRNA抑制MSK1表达对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响及其机制
【作者】
黎华辉
方欣
郭向华
何志巍
李彬彬
广东医科大学广东省医学分子诊断重点实验室
东莞523808
广东医科大学病理生理学教研室
东莞523808
【关键词】
鼻咽癌
丝裂原和应激激活的
【摘要】目的丝裂原和应激激活的蛋白激酶1(MSKl)的异常活化在多种肿瘤的发生中起着重要作用。采用小于扰RNA(siRNA)抑制MSKl的表达,观察其对人鼻咽癌细胞CNE2增殖的影响,并探讨其可能机制。方法构建靶向MSKl的siRNA真核表达质粒,转染CNE2细胞并筛选获得稳定表达细胞株。将细胞分为空白对照组、阴性对照组、实验组。空白对照组:不转染质粒的CNE2细胞;阴性对照组:稳定转染阴性对照质粒的CNE2细胞(si-mock);实验组:稳定转染MSKlsiRNA质粒的CNE2细胞(si-MSKl)。实时荧光定量PCR和Westernblot检测细胞中MSKlmRNA和蛋白表达的改变;CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期的改变;Westernblot检测组蛋白H3Serl0磷酸化水平的改变;双萤光素酶报告系统和Westernblot检测c-jun转录活性和蛋白表达的改变。结果与空白对照组相比,实验组在48、72和96h的细胞增殖抑制率明显增高(P〈0.05);与阴性对照组相比,实验组细胞在24h后生长速度明显减慢,其48、72和96h的细胞增殖抑制率均明显增高(P〈0.05)。与空白对照组比较,实验组细胞的克隆形成能力明显降低(P〈0.01);与阴性对照组相比,实验组细胞克隆形成能力的降低,其克隆形成数目明显减少[(221.00±20.08)个/300个细胞伽(99.67±15.57)个/300个细胞,P〈0.01]。与阴性对照组相比,实验组细胞周期发生明显改变,G。/G,期细胞比例增加,而s期细胞比例明显减少(P〈0.01)。与空白对照组和阴性对照组相比,实验组能显著降低组蛋白H3Serl0磷酸化水平(P〈0.01),而总组蛋白H3的表达则无明显改变。与空白对照组相比,实验组c-jun蛋白表达量和转录活性明显下降(P〈0.05);与阴性对照组相比,实验组CNE2细胞c-jun转录活性明显降低[(100.00±0.00)�
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