RNA结合蛋白RNPC1对肾癌细胞生物学功能的影响
【作者】
黄雯
季春梅
杨海伟
石靓
孟玲
魏继福
南京医科大学第一附属医院药学部
南京210029
南京医科大学第一附属医院泌尿外科
南京210029
南京医科大学第一附属医院乳腺外科
南京210029
【关键词】
RNPC1
肾癌
生物学功能
【摘要】目的RNPCI在人体肿瘤中可能是抑癌基因也可能是促癌基因,其在肾癌细胞中的角色尚不明朗。研究RNPCI对肾癌细胞生物学功能的影响,以探索RNPCI的表达与肾癌发生发展之间的关系。方法将肾癌细胞CAKI-1和CAKI-2分别构建RNPCI基因高表达(RNPCI组)、短发夹RNA干扰RNPCI基因表达(shRNPCI组),另设空白对照组以及阴性对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westernblot检测RNPCImRNA及蛋白在肾癌细胞中的表达情况。运用慢病毒转染技术,建立稳定表达的RNPCI高表达,干扰的肾癌细胞系。检测RNPCI稳转的肾癌细胞系中mRNA及蛋白的表达情况。通过CCK-8细胞增殖实验、克隆实验、划痕实验、迁移侵袭实验,检测RNPCI对肾癌细胞增值,迁移,侵袭能力的影响。运用Westernblot检测RNPCI稳转的肾癌细胞系中EMT通路蛋白表达水平的变化,探究RNPCI对。肾癌细胞生物学功能影响的分子机制。结果Westernblot和qRT-PCR结果表明,与空白对照组比较,RNPCI组的RNPCI水平明显上调(P〈0.05),与阴性对照组比较,shRNPCI组的RNPCI水平明显下调(P〈0.05)。RNPCI组细胞A450值和克隆计数较空白对照组明显降低;shRNPCI组细胞A。值和克隆计数较阴性对照组明显升高(P〈0.05)。划痕实验结果表明shRNPCI组细胞迁移距离[CAKI-1:(303.98±12.31)μm,CAKI-2:(352.50±24.60)μm]较阴性对照组[CAKI-1:(303.98±12.31)μm,CAKI-2:(237.25±12.89)μm]增大(P〈0.05);RNPCI组细胞迁移距离[CAKI-1:(132.52±35.13)μm,CAKI-2:(126.50±19.24)Ixm]较空白对照组[CAKI-1:(281.65+19.71)μm,CAKI-2:(300.00+22.28)μm]减小(P〈0.05)。细胞的迁移和侵袭实验表明,shRNPCI组迁移和侵袭的细胞数较阴性对照组明显增多(P〈0.05);迁移和侵袭的细胞数少于空白对照组(P〈0.05)。结论RNPCI基因�
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