【摘要】目的 强啡肽镇痛效应强、安全性好、无呼吸抑制和成瘾性等优势,是目前生物镇痛研究的重点。探讨慢病毒介导的大鼠前强啡肽（PDYN）基因在骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）中的表达,为后续研究大鼠癌痛模型的生物镇痛提供条件。方法 采用贴壁筛选法分离和扩增BM-MSCs,流式细胞学和体外成脂、成骨细胞诱导分化实验鉴定。构建大鼠PDYN慢病毒载体并感染BM-MSCs,倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达和Western blot法筛选最适感染复数（MOI）;实验分为空白组（BM-MSCs）、实验组（PCDH-CMV-PDYN-EF1-cop GFP）、空载体组（PCDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP）,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）和Western blot检测PDYN表达变化,采用免疫细胞化学染色法检测强啡肽蛋白表达。结果BM-MSCs呈长梭形纤维细胞样贴壁生长,多数表达CD29、CD44、CD90,少数表达CD45。成脂诱导培养后油红O染色为阳性;成骨诱导培养后出现矿化结节,经茜素红染色呈橘红色。流式细胞仪检测示BM-MSCs细胞中CD29、CD90、CD44、CD45阳性率分别为（99.80±0.19）%、（99.62±0.24）%、（96.86±1.27）%、（0.82±0.06）%,转染PDYN基因后BM-MSCs表面标记CD29、CD90、CD44、CD45阳性率分别为（99.59±0.34）%、（98.06±1.51）%、（95.23±0.71）%、（10.23±0.59）%,转染前后BM-MSCs干细胞特性差异无统计学意义（P〉0.05）。经PCR扩增克隆测序鉴定慢病毒载体PCDH-CMV-PDYN-EF1-cop GFP构建成功,重组慢病毒滴度为5×106IU/m L。绿色荧光蛋白的表达和Western blot结果示慢病毒MOI=100为最佳病毒感染复数。qPCR、Western blot检测到经慢病毒载体感染后的BM-MSCs中PDYN基因表达均上调（P〈0.05）,免疫细胞化学染色检测显示强啡肽蛋白表达显著增强。结论 成功培养BM-MSCs和构建大鼠PDYN基因过表达慢病毒载体,在BM-MSCs中能高效稳定表达PDYN基因和分泌强啡肽蛋白。